11月8日，國家衛(wèi)健委發(fā)布《臨床微生物培養(yǎng)、鑒定和藥敏檢測系統(tǒng)的性能驗證》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，其中對分子 POCT 系統(tǒng)的性能驗證進行了全方位的規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)化，是目前首個分子POCT系統(tǒng)性能驗證行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)！

1.1 驗證時機見本標(biāo)準(zhǔn)第 5.1 條通用要求

1.2 驗證標(biāo)本要求

性能驗證樣品的選擇：

①可溯源性?？蛇x擇標(biāo)準(zhǔn)菌株、獲得認(rèn)證的商品化質(zhì)控品/標(biāo)準(zhǔn)品，或者經(jīng)過臨床檢測陽性的標(biāo)本。在準(zhǔn)備驗證標(biāo)本時，若無法獲得足量陽性樣品，可采用人工制備樣品。若弱陽性標(biāo)本不好獲取，可適當(dāng)稀釋陽性標(biāo)本。

②適用性。要求有代表性的病原體或基因型，對于多重病原體或基因型的核酸檢測，應(yīng)盡量覆蓋常見類別。此外，宜選擇與臨床檢測標(biāo)本具有相同基質(zhì)的弱陽性樣品。

③均質(zhì)性。要求所選樣品濃度與預(yù)期相符，樣品濃度均一。

1.3 驗證前準(zhǔn)備工作

在進行性能驗證前，確保儀器狀態(tài)良好，操作者需經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)。

1.4 驗證方案

1.4.1 定性檢測的驗證內(nèi)容包括：符合率驗證、LOD 驗證和交叉反應(yīng)。

1.4.1.1 符合率驗證

1.4.1.1.1 驗證方案

收集臨床標(biāo)本，應(yīng)包括陰性（2例）和陽性（3例，其中至少1例為弱陽性）。收集后的標(biāo)本在一周內(nèi)檢測，結(jié)果與已知檢測結(jié)果進行比對。對于多重病原體或基因型核酸檢測，應(yīng)盡量對常見類別分別進行符合率驗證。

1.4.1.1.2 可接受標(biāo)準(zhǔn)

檢測的陰性和陽性結(jié)果與已知檢測結(jié)果全部一致，即符合率符合要求。

1.4.1.2 LOD 驗證

1.4.1.2.1 驗證方案

將一份已知定值的標(biāo)準(zhǔn)品或已用其他方法準(zhǔn)確標(biāo)定濃度的臨床標(biāo)本，稀釋到說明書申明的LOD，重復(fù)測量20次，也可采用重復(fù)檢測5次。

1.4.1.2.2 可接受標(biāo)準(zhǔn)

重復(fù)檢測5次時，要求100％檢出。重復(fù)檢測20次，要求≥17次檢出。

1.4.1.3 交叉反應(yīng)

1.4.1.3.1 驗證方案

產(chǎn)生交叉反應(yīng)的靶物質(zhì)可能包括導(dǎo)致類似臨床表現(xiàn)的病原以及遺傳相關(guān)物質(zhì)。為了評估潛在交叉反應(yīng)，可以在特定的已知患者標(biāo)本中加入與之密切相關(guān)的病原樣品,其濃度水平能代表或超出患者標(biāo)本中可能出現(xiàn)的水平。

向陰性患者標(biāo)本中添加密切相關(guān)的病原樣品，重復(fù)檢測5次。

1.4.1.3.2 可接受標(biāo)準(zhǔn)

檢測結(jié)果全部為陰性時，則該方法抗交叉反應(yīng)能力符合要求。

1.4.2 定量檢測的驗證內(nèi)容包括：正確度、精密度、線性區(qū)間和 LOQ 驗證。

1.4.2.1 正確度驗證

1.4.2.1.1 驗證方案

一種方法是采用參考材料，可來源于室間質(zhì)量評價正確度驗證計劃、廠家提供的正確度驗證計劃的質(zhì)控品、其他第三方供應(yīng)商提供等。至少選擇兩個濃度水平的參考材料，對每個參考材料分別重復(fù)測量3次，比較均值與標(biāo)定濃度值，計算偏倚。

另一種方法是采用患者診斷明確的標(biāo)本，收集臨床標(biāo)本20例，標(biāo)本的濃度盡量涵蓋線性范圍。收集后的標(biāo)本在一周內(nèi)集中檢測，每個標(biāo)本重復(fù)檢測2次。取均值與原檢測結(jié)果進行比對。計算兩者線性相關(guān)系數(shù)（R），并進一步計算兩者各自的回歸曲線。分別計算當(dāng)檢測值log10=3、4、5、6、7 時的允許總誤差（total error，TE）。計算TE = 偏倚（Bias）+3CV（此處 CV 采用精密度性能評估中精密度值）。

1.4.2.1.2 可接受標(biāo)準(zhǔn)

與目標(biāo)TE比較（目標(biāo)TE為廠商允許的總誤差10％），TE＜10％表示可接受。

1.4.2.2 精密度驗證

1.4.2.2.1 驗證方案

連續(xù)5天，每天檢測1個分析批次，濃度水平選擇4～5倍LOD，對樣品每天重復(fù)檢測5次，數(shù)據(jù)通過log10轉(zhuǎn)換后使用，收集5×5=25個有效數(shù)據(jù)，并通過統(tǒng)計分析評價方法計算精密度值（精密度值=標(biāo)準(zhǔn)偏差/計算結(jié)果的算術(shù)平均數(shù)×100％）。

1.4.2.2.2 可接受標(biāo)準(zhǔn)

與試劑說明書上的允許范圍進行比較，判斷結(jié)果是否可接受。

1.4.2.3 線性區(qū)間驗證

10.1.4.2.3.1 驗證方案

常用方法為選取一份結(jié)果接近線性范圍上限的患者標(biāo)本，用正常人陰性標(biāo)本按1:10、1:100、1:1000、1:10000、1:100000系列稀釋（比制造商聲明的分析測量低限低一個數(shù)量級），可選擇5～7個濃度水平，以稀釋計算值作為理論值，各稀釋樣品的實測值與理論值進行回歸分析，對每個樣品進行檢測，經(jīng)統(tǒng)計后擬合回歸線y＝bx+a。

1.4.2.3.2 可接受標(biāo)準(zhǔn)

將擬合回歸線的相關(guān)系數(shù)r≥0.975（r 2≥0.95），b值在1±0.05范圍作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.4.2.4 LOQ 驗證

1.4.2.4.1 驗證方案

將一份已知定值的標(biāo)準(zhǔn)品或可以量值溯源的定值質(zhì)控品，稀釋到說明書申明的LOQ，重復(fù)測量20次。

1.4.2.4.2 可接受標(biāo)準(zhǔn)

每個樣品的檢測結(jié)果與該樣品的參考值（或均值）的偏差和誤差目標(biāo)進行比較，要求≥17個檢測結(jié)果滿足上述要求。

資料來源：《臨床微生物培養(yǎng)、鑒定和藥敏檢測系統(tǒng)的性能驗證》